醫院層流手術室潔淨車間空氣壓力根據其不同區域（如手術間、無菌準備間、刷手間、麻醉間和周圍乾淨區域等）潔淨度不同要求而不同。不同級別的層流手術室其空氣潔淨度標準不同，例如美國聯邦標準1000級為每立方尺空氣中≥0.5μm的塵粒數，≤1000顆或每升空氣中≤35顆。10000級層流手術室的標準為每立方尺空氣中≥0.5μm的塵粒數≤10000顆或每升空氣中≤350顆,依次類推。
1、嚴格淨化：手術室空氣淨化系統在手術室牆面四角、淨化機組、天花板、走廊、新風機、排風機都設有不同級別的空氣篩檢程式，並對其進行定期清潔、維修和更換，嚴格保證室內空氣的無菌；另外，層流手術室的衛生管理工作除了日常清潔工作和過去一樣，不能有絲毫放鬆，還對室內的清潔工作有特殊的要求，室內牆角全部為弧形結構設計，找不到任何一個90°的牆角，使細菌無處藏身，避免了清除不盡的死角，並且室內無須使用物理或化學方法進行消毒，這樣既節省勞動又防止外來污染的進入。
a、手術區：需要特別保護的手術臺及其周圍區域。其中
Ⅰ級手術室的手術區是指手術臺兩側邊各外推0.9M、兩端各外推至少0.4M後（包括手術臺）的區域
b、空氣潔淨技術：是指通過科學設計的多級空氣過濾系統，最大程度地清除空氣中的懸浮微粒及微生物，創造潔淨環境的有效手段。
c、空氣潔淨度：表示空氣潔淨的程度，以含有的微粒（無生命微粒和有生命微粒）濃度衡量，濃度高則潔淨度低，反之則高。
d、空氣潔淨度級別：以數位表示的空氣潔淨度等級，數位越小，級別越高，潔淨度越高；反之則潔淨度越低。
e、浮游菌濃度：利用採樣培養基培養得出的單位體積空氣中的浮游菌數（cfu/ m3?3;）。
f、沉降菌濃度：用直徑為90mm的培養皿靜置於室內30min，然後培養得出的每一皿的沉降菌落數。
g、表面染菌密度：用特定方法擦拭表面並按要求培養後得出的菌落數（cfu/c㎡）。
h、Ⅱ級手術室的手術區是指手術臺兩邊各外推至少0.6M、兩端各外推至少0.4M後（包括手術臺）的區域Ⅲ級手術室的手術區是指手術臺四邊各外推至少0.4M後（包括手術臺）的區域。
Ⅳ級手術室不分手術區和周邊區。Ⅰ級眼科專用手術室手術區每邊不小於1.2M。
i、靜態：室內設施及功能齊備，空調淨化系統正常運行，但無人員的狀態。
j、動態：一切系統正常運行、醫護人員進行正常操作的狀態。
k.潔淨手術部：以數間潔淨手術室為核心包括各類輔助用房，自成體系的功能區域。
2、正壓通氣：百級層流手術室不僅要求高度潔淨的空氣(進入手術室的空氣首先須經高效篩檢程式淨化)，而且要求能控制氣流的流通方向(即採用層流超淨裝置)，手術室內形成正壓環境，使氣流從潔淨度高的手術區域流向潔淨度低的區域，一股細小、薄層的氣流，以均勻的流速向同一方向輸送，並帶走和排出氣流中的塵埃顆粒(塵粒)和細菌。
3、單通道流向：百級層流手術室與消毒櫃之間製作了一堵牆，並設立進、出單通道，需消毒的物品經過“輸出”通道直接從手術室轉移到消毒櫃，消毒後經過“輸入”通道轉移到手術室，這樣避免了消毒物品在轉移的過程中二次污染。